إن عزل خلايا مناعية معينة أمر بالغ الأهمية لمجموعة متنوعة من الاستخدامات في علم الأحياء الخلوية، علم المناعة، أبحاث السرطان، والطب التجديدي. تم تطوير عدة تقنيات لتحقيق عزل خلايا عالي النقاء، ولكل منها مزايا وقيود فريدة. فيما يلي نظرة عامة على أكثر التقنيات عملية:
تستخدم هذه التقنية كريات مغناطيسية مغطاة بأجسام مضادة لربط الخلايا المستهدفة، والتي يتم فصلها بعد ذلك باستعمال حقل مغناطيسي.
الاستخدامات:
o عزل خلايا المناعة خلايا T ، خلايا B ، خلايا دندريتية
o إثراء خلايا الجذع
o عزل خلايا نادرة مثل خلايا الورم الدائرة
المزايا:
سريع، واقتصادي، وقابل للتوسع.
لطيف على الخلايا، مما يحافظ على حيويتها.
القيود:
o دقة أقل مقارنةً بـ FACS.
o قدرة محدودة على التعدد في التفكيك.
في هذه الطريقة، يتم وسم الخلايا بأجسام مضادة فلوريسنت ويتم فرزها بناءً على إشارات الفلوريسنس والتشتت باستعمال متحديد تدفق الخلايا.
الاستخدامات:
عزل عالي النقاء لخلايا المناعة، خلايا الجذع، وخلايا السرطان.
فرز الخلايا الفردية لأغراض الجينوميات والتفكيك.
المزايا:
دقة عالية وقدرة على التعدد في التفكيك (مؤشرات متعددة).
يمكنه فرز الخلايا الفردية بدقة عالية.
القيود:
أدوات مكلفة.
أبطأ من MACS لعدد كبير من الخلايا.
تستخدم هذه التقنية الليزر لقطع وعزل الخلايا أو المناطق المحددة من أقسام الأنسجة تحت الرؤية المجهرية.
الاستخدامات:
تفكيك البيئات الدقيقة للأورام.
عزل الخلايا العصبية أو أنواع الخلايا النادرة من الأنسجة المثبتة.
المزايا:
اختيار مكاني دقيق.
تعمل مع العينات المثبتة أو المجمدة.
القيود:
قدرة إنتاجية متدنية.
تتطلب مهارة عالية.
يتم فصل الخلايا في قنوات دقيقة باستعمال قوى هيدروديناميكية، دي الكتروفوريس، أو التقاط قائم على الانجذاب.
الاستخدامات:
عزل خلايا الورم الدائرة.
تفكيك الخلايا الفردية وفرزها بناءً على القطيرات.
المزايا:
متطلبات حجم عينة متدنية.
دقة عالية وإمكانية الأتمتة.
القيود:
قدرة محدودة على التوسع لعينات كبيرة.
في هذه الطريقة، يتم التقاط الخلايا على صفائح مغطاة بأجسام مضادة من خلال علامات سطحية محددة.
الاستخدامات:
عزل تحت مجموعات الخلايا العصبية.
تنقية الخلايا الدبقية قليلة التغصن أو الخلايا النجمية.
المزايا:
بسيطة وغير مكلفة.
يمكن تحقيق نقاء عالي.
القيود:
قدرة إنتاجية متدنية.
محدودة لأنواع الخلايا اللاصقة.
تستخدم هذه التقنية أغشية مسامية أو مرشحات دقيقة لفصل الخلايا بناءً على اختلاف الحجم.
الاستخدامات:
إثراء الخلايا الأكبر مثل CTCs، الميجاكاريوسيتات.
إزالة الخلايا الميتة أو الحطام.
المزايا:
سريع وغير معتمد على الوسم.
تكلفة متدنية.
القيود:
دقة متدنية لا يمكن فصل الخلايا ذات الأحجام المتشابهة.
انسداد العمود.
1. يعتمد اختيار التقنية على التطبيق:
2. للفرز السريري عالي الفعالية: MACS أو FACS.
3. لفصل الخلايا النادرة: الميكروفلويديك أو FACS.
4. لدراسات الأنسجة المثبتة: LMD.
لفصلبسيطومنخفضالتكلفة: الإيمونوبانينغأوالترشيح.